生物反應器在肝癌 3D 類器官培養(yǎng)中通過模擬體內(nèi)微環(huán)境，實現(xiàn)了腫瘤細胞的三維立體生長與功能維持，為肝癌研究提供了高生理相關性的模型平臺。以下從技術原理、培養(yǎng)方法、核心優(yōu)勢及應用場景展開說明：

一、技術原理：動態(tài)調控與仿生環(huán)境構建

生物反應器通過物理場模擬與流體力學設計，構建接近肝癌組織的復雜微環(huán)境：

1.微重力 / 超重力模擬

旋轉壁式生物反應器（RWV）：通過水平旋轉（10-20 rpm）動態(tài)平衡重力與離心力，使肝癌細胞處于 “自由懸浮” 狀態(tài)，避免沉降堆積。這種環(huán)境促進細胞自組裝形成實體瘤樣球狀體，內(nèi)部包含缺氧核心（HIF-1α 陽性區(qū)域）與增殖邊緣，與患者腫瘤樣本的結構一致性達 85%。

隨機定位儀（RPM）：通過 X、Y、Z 軸隨機旋轉（角度變化頻率可調），分散重力矢量，模擬太空微重力（<0.01g），可誘導肝癌細胞發(fā)生上皮 - 間質轉化（EMT），增強侵襲能力（如 N-cadherin 表達上調 2 倍）。

2.動態(tài)流體調控

微流控灌注系統(tǒng)：集成 3D 打印微通道，模擬肝臟門靜脈血流（流速 0.1-1 mL/min），實現(xiàn)營養(yǎng)物質（如葡萄糖、氨基酸）的梯度輸送與代謝廢物（如乳酸、氨）的高效清除。例如，在肝癌類器官培養(yǎng)中，動態(tài)灌流可使類器官的存活時間延長至 2 周以上，而靜態(tài)培養(yǎng)僅能維持 5-7 天。

剪切力模擬：通過流場仿真優(yōu)化通道設計，避免局部高剪切力（>0.5 Pa）損傷細胞。例如，迪必爾生物的 MiniWave 反應器通過搖擺運動（20 rpm、15° 傾角），在 T25 培養(yǎng)瓶中形成均勻剪切應力（<100 mPa），支持肝癌細胞懸浮成球，4 天后球體直徑可達 200 μm。

二、培養(yǎng)方法：從細胞接種到功能驗證

1.細胞預處理與接種

組織解離：肝癌手術切除組織需剪切成 1-3 mm3 小塊，通過膠原酶 IV 消化（0.25 mg/mL，37℃孵育 30 分鐘）獲得單細胞懸液。

基質膠包裹：將細胞（密度 1×10? cells/mL）與低硬度基質膠（如 KemiGel，<200 Pa）混合后接種至生物反應器，添加 RGD 短肽（50 μg/mL）增強細胞 - 基質黏附。

共培養(yǎng)體系：為模擬腫瘤微環(huán)境，可加入肝星狀細胞（HSC）、內(nèi)皮細胞（EC）等非腫瘤細胞。例如，徑向流生物反應器（RFB）中共培養(yǎng)肝癌細胞、HSC 和 EC，可形成類似肝竇的結構，支持膽汁酸代謝與藥物轉運功能。

2.動態(tài)培養(yǎng)參數(shù)優(yōu)化

重力條件：根據(jù)研究目的選擇重力模式，如模擬微重力（10-20 rpm）用于腫瘤球形成，或施加周期性拉伸應力（0.1-1 Hz）模擬肝纖維化時的機械張力。

培養(yǎng)基配方：基礎培養(yǎng)基采用 DMEM/F12，添加 EGF（0.05 μg/mL）、HGF（0.03 μg/mL）促進細胞增殖，同時補充地塞米松（1 μM）維持肝細胞特異性功能（如白蛋白分泌）。對于轉移性肝癌類器官，可加入 TGF-β1（5 ng/mL）誘導上皮 - 間質轉化。

實時監(jiān)測：通過拉曼光譜分析類器官代謝狀態(tài)（如葡萄糖消耗率），結合電阻抗傳感追蹤細胞增殖，可提前 48 小時預測化療耐藥性的出現(xiàn)（準確率 92%）。

三、核心優(yōu)勢：突破傳統(tǒng)培養(yǎng)的局限性

1.結構與功能的高度仿生

腫瘤異質性保留：動態(tài)培養(yǎng)的肝癌類器官包含增殖型、侵襲型、代謝型等功能亞群，單細胞測序顯示其基因表達譜與患者腫瘤樣本的吻合度達 85%。

藥物反應預測性提升：與 2D 培養(yǎng)相比，生物反應器中肝癌類器官對索拉非尼的 IC??值更接近臨床患者數(shù)據(jù)（差異 < 15%），且可模擬藥物滲透梯度，評估納米藥物的靶向效率。

2.規(guī)?；c高通量潛力

多器官串聯(lián)培養(yǎng)：通過微流道連接肝癌類器官與肝竇內(nèi)皮細胞，可模擬藥物代謝 - 毒性級聯(lián)效應。例如，他汀類藥物引起的橫紋肌溶解可通過心肌類器官的肌酸激酶釋放提前預警。

自動化集成：DSO Apollo? 全自動系統(tǒng)整合微流控芯片與熒光成像，可同時培養(yǎng) 384 個類器官，7 天內(nèi)完成 12 種藥物的敏感性測試，效率是傳統(tǒng) Transwell 的 5 倍。

四、應用場景：從基礎研究到臨床轉化

1.腫瘤生物學機制解析

轉移路徑模擬：在 RWV 中構建肝癌 - 淋巴結類器官串聯(lián)模型，通過熒光標記追蹤腫瘤細胞的淋巴管遷移，發(fā)現(xiàn)趨化因子 CXCL12 的梯度分布是轉移的關鍵驅動因素。

代謝重編程研究：動態(tài)培養(yǎng)的肝癌類器官顯示糖酵解活性顯著高于靜態(tài)培養(yǎng)（葡萄糖消耗率提升 3 倍），與 Warburg 效應一致，可用于篩選靶向代謝通路的藥物。

2.藥物研發(fā)與個性化醫(yī)療

高通量篩選：MiniWave 反應器支持 16 個培養(yǎng)單元同步運行，通過梯度濃度測試（如順鉑 0.1-10 μM），可快速篩選潛在候選藥物。例如，在肺癌類器官中，該系統(tǒng)可提前 48 小時預測 EGFR 抑制劑耐藥性。

患者來源類器官（PDO）藥敏測試：針對結直腸癌患者，生物反應器可在 7 天內(nèi)完成 12 種化療方案的篩選，指導臨床用藥的準確率達 82%（傳統(tǒng) 2D 培養(yǎng)僅 55%）。

3.組織工程與再生醫(yī)學

生物人工肝構建：將肝癌類器官與肝細胞共培養(yǎng)于 RFB 系統(tǒng)，可形成具有解毒功能的肝組織模塊。中科院開發(fā)的 hiHep-BAL 裝置已在臨床前模型中證明，能逆轉肝切除術后肝衰竭，顯著提升存活率。

3D 打印協(xié)同：生物反應器培養(yǎng)的類器官 - 基質膠復合物可作為生物墨水，用于打印血管化肝組織，其血管密度較靜態(tài)培養(yǎng)提升 3 倍。

五、挑戰(zhàn)與未來方向

1.技術標準化與成本控制

質量控制難題：不同實驗室的類器官培養(yǎng)結果差異較大，需建立統(tǒng)一標準（如類器官形成率 > 80%、基因表達穩(wěn)定性 CV<15%）。賽奧維度等企業(yè)正通過AI 驅動的參數(shù)優(yōu)化算法，將模型構建周期縮短 40%。

規(guī)模化成本：盡管單臺設備成本降低（如 Cellspace-3D 約 19 萬元），但高通量實驗仍需多臺并聯(lián)，初期投入較高（如 10 臺系統(tǒng)約 190 萬元），限制中小型實驗室的應用。

2.技術融合與創(chuàng)新

多模態(tài)成像整合：集成光片顯微鏡與近紅外二區(qū)成像，可實時三維重構類器官內(nèi)部血管網(wǎng)絡與代謝狀態(tài)（如 NADH 熒光），提升數(shù)據(jù)維度。

基因編輯結合：通過 CRISPR-Cas9 在肝癌類器官中敲除特定基因（如 TP53），可解析其在腫瘤發(fā)生中的作用，并篩選靶向治療藥物。

結論

生物反應器在肝癌 3D 類器官培養(yǎng)中的應用，通過動態(tài)環(huán)境模擬、多細胞互作支持與高通量集成，為肝癌研究提供了高生理相關性的模型平臺。其核心價值在于將靜態(tài)培養(yǎng)轉化為動態(tài)系統(tǒng)，不僅能更精準地模擬腫瘤微環(huán)境，還可加速藥物研發(fā)與個性化醫(yī)療進程。隨著技術成本的降低與智能化程度的提升，生物反應器有望成為連接基礎研究與臨床應用的關鍵橋梁，推動肝癌治療的突破性進展。