THP-1（Tumor necrosis factor (TNF)-α stimulated human peripheral blood monocytes）是一種常用的人類單核細胞系，廣泛用于炎癥、免疫和感染等研究領域。為了確保THP-1細胞的正常生長和實驗結果的可靠性，需要優(yōu)化和維持適宜的培養(yǎng)條件。

1. 細胞培養(yǎng)基和添加物

常用培養(yǎng)基：THP-1細胞通常在RPMI 1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)。RPMI 1640培養(yǎng)基是一種富含氨基酸、維生素和其他有機物質的培養(yǎng)基，適合細胞的生長和增殖。

血清：通常將Fetal Bovine Serum (FBS) 添加至培養(yǎng)基中，使其濃度達到10-20%。FBS中含有豐富的生長因子和營養(yǎng)物質，有助于細胞的生長和增殖。

抗生素：可選擇添加適當濃度的抗生素（如青霉素/鏈霉素）來防止細菌污染。

2. 培養(yǎng)條件調節(jié)

溫度和CO2濃度：THP-1細胞通常在37°C、5% CO2的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。恒定的溫度和CO2濃度有助于細胞的正常生長和代謝。

濕度：保持培養(yǎng)箱內的濕度在適宜范圍內，避免細胞培養(yǎng)過程中的脫水或過度干燥。

3. 傳代和細胞密度控制

傳代：THP-1細胞通常在70-80%的密度下進行傳代。傳代時，可以使用0.25%的Trypsin-EDTA將細胞從培養(yǎng)瓶中分離，并將分離后的細胞重新接種到新的培養(yǎng)瓶中。

細胞密度控制：細胞密度的控制對于細胞的健康生長至關重要。避免細胞過度密集或過度稀疏的情況發(fā)生，維持適當?shù)募毎芏扔兄诩毎姆€(wěn)定生長和培養(yǎng)質量。

4. 細胞處理和存儲

凍存：在培養(yǎng)細胞的不同階段，如在細胞生長的高峰期或在完成實驗后，可以使用合適的凍存液將細胞凍存起來，以備將來使用。常用的凍存液包括含有10% DMSO的凍存液等。

解凍：解凍時，將凍存的THP-1細胞在37°C的水浴中快速解凍，然后將其轉移至含有培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，并在恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)至細胞重新附著和生長。

5. 實驗技術和操作

培養(yǎng)瓶處理：在使用培養(yǎng)瓶前，必須對其進行消毒，并在接種細胞時確保操作無菌。

細胞培養(yǎng)記錄：定期記錄培養(yǎng)細胞的生長情況、細胞密度和傳代次數(shù)等關鍵參數(shù)，以監(jiān)控細胞的健康狀態(tài)和培養(yǎng)質量。

6. 質量控制和檢測

細胞鑒定：定期進行細胞的鑒定和認證，確保所使用的THP-1細胞系的純度和穩(wěn)定性。

污染檢測：定期檢測培養(yǎng)細胞中的細菌、真菌和支原體等污染物，確保培養(yǎng)細胞的純凈度。

通過優(yōu)化培養(yǎng)條件和操作技術，可以有效地維持THP-1細胞的健康狀態(tài)和穩(wěn)定性，為相關炎癥、免疫和感染等領域的研究提供可靠的實驗模型和數(shù)據(jù)支持。